Das vollautomatische Gerät zur Extraktion und Detektion von Nukleinsäuren von New Tech

Fünf Stärke:
● Gerät, das mit dem Nukleinsäureextraktions- und -reinigungsschritt konfiguriert ist
● Instrument mit Ultraschall-Extraktionsmodul konfiguriert
● Instrument mit Vollautomatik konfiguriert
● Instrument mit variabler Temperaturverstärkung konfiguriert
● Instrument mit vollständig geschlossenem Reagenzienkit konfiguriert

1.Müssen Nukleinsäure-Nachweisreagenzien extrahiert und gereinigt werden?
Das Prinzip des Nukleinsäurenachweises ist wie folgt: Unter der Wirkung eines Primers wird DNA-Polymerase verwendet, um eine Kettenreaktionsamplifikation an Template-DNA/RNA durchzuführen (was eine umgekehrte Transkription von NA erfordert), und dann wird die Menge des freigesetzten Fluoreszenzsignals erfasst, um es zu bestimmen ob die Probe die Nukleinsäure (DNA/RNA) des nachzuweisenden Erregers enthält.

1) Proben, die nicht extrahiert oder gereinigt wurden, können viele Komponenten enthalten, die das Endergebnis beeinflussen: Nuklease (die die Zielnukleinsäure auflösen und falsch negative Ergebnisse verursachen kann), Protease (die die DNA-Polymerase reduzieren und falsch negative Ergebnisse verursachen kann), Schwermetall Salz (was zur Inaktivierung der Synthase führt und falsch positive Ergebnisse verursacht), zu saurer oder zu alkalischer pH-Wert (was zum Scheitern der Reaktion führen kann), unvollständige RNA (was zu falsch negativen Reverse-Transkriptions-Fehlern führt).

2) Einige Proben lassen sich nur schwer direkt amplifizieren: Gram-positive und einige Parasiten können wegen ihrer dicken Zellwände und anderen Strukturen nicht mit dem Extraktions-freien Kit getestet werden, wenn sie nicht den Nukleinsäure-Extraktions- und Reinigungsprozess durchlaufen Proben.

Daher wird empfohlen, das Testkit oder Instrument auszuwählen, das für den Nukleinsäureextraktionsschritt konfiguriert ist.

2. Chemische Extraktion oder physikalische Ultraschall-Fragmentationsextraktion?
Im Allgemeinen kann die chemische Extraktion für den Großteil der Vorbehandlung und Reinigung eingesetzt werden.Bei dickwandigen grampositiven Bakterien und einigen Parasiten ist es jedoch auch so, dass durch chemische Extraktion keine wirksamen Nukleinsäure-Templates erhalten werden können, was zu einem falsch negativen Nachweis führt.Darüber hinaus werden bei der chemischen Extraktion häufig starke Mittel eingesetzt. Wenn die Elution nicht gründlich ist, kann leicht starkes Alkali in das Reaktionssystem gelangen, was zu ungenauen Ergebnissen führt.

Die Ultraschallfragmentierung nutzt die physikalische Zerkleinerung, die von GeneXpert, einem führenden Unternehmen auf dem Gebiet der POCT für den menschlichen Gebrauch, erfolgreich eingesetzt wurde und einen absoluten Vorteil bei der Nukleinsäureextraktion einiger komplexer Proben (wie Mycobacterium tuberculosis) bietet.

Daher wird empfohlen, ein Testkit oder Instrument auszuwählen, das mit einem Nukleinsäureextraktionsschritt ausgestattet ist.und es ist optimal, wenn ein Ultraschall-Extraktionsmodul vorhanden ist.

3. Manuell, halbautomatisch und vollautomatisch?
Dies ist ein Problem der Arbeitskosten und der Arbeitseffizienz.Derzeit verfügen Tierkliniken nicht über genügend Personal, und die Extraktion und Detektion von Nukleinsäuren ist eine Arbeit, die bestimmte Fähigkeiten und Erfahrungen erfordert.Es besteht kein Zweifel, dass die vollautomatische Nukleinsäure-Extraktions- und Detektionsmaschine die perfekte Wahl ist.

4. Verstärkung bei konstanter Temperatur oder Verstärkung bei variabler Temperatur?
Bei der Amplifikationsreaktion handelt es sich um eine Verbindung zum Nachweis von Nukleinsäuren, und die damit verbundene professionelle Technologie ist komplex.Grob gesagt werden Enzyme zur Vervielfältigung der Nukleinsäure eingesetzt.Beim Verstärkungsprozess wird das verstärkte Fluoreszenzsignal bzw. das eingebettete Fluoreszenzsignal erfasst.Generell gilt: Je früher das Fluoreszenzsignal auftritt, desto höher ist der Zielgengehalt der Probe.

Die Amplifikation bei konstanter Temperatur ist eine Nukleinsäureamplifikation bei einer festen Temperatur, während die Amplifikation bei variabler Temperatur eine zyklische Amplifikation ist, die streng nach Denaturierung, Annealing und Verlängerung erfolgt.Die Amplifikationszeit bei konstanter Temperatur wurde durchgeführt, während die Amplifikationszeit bei variabler Temperatur stark von der Geschwindigkeit des Temperaturanstiegs und -abfalls des Instruments abhängt (derzeit konnten viele Hersteller 40 Amplifikationszyklen in etwa 30 Minuten durchführen).

Wenn die Laborbedingungen gut sind und die Zoneneinteilung streng ist, kann man davon ausgehen, dass der Genauigkeitsunterschied zwischen beiden nicht groß sein wird.Durch die Amplifikation bei variabler Temperatur werden jedoch mehr Nukleinsäureprodukte in relativ kürzerer Zeit synthetisiert.Für Laboratorien ohne strenge Zoneneinteilung und ohne professionelles Schulungspersonal ist das Risiko des Austretens von Nukleinsäureaerosolen größer, da bei einem Austreten ein falsch positives Ergebnis auftritt und das äußerst schwer zu beseitigen ist.

Darüber hinaus ist die Amplifikation bei konstanter Temperatur auch anfälliger für unspezifische Amplifikationen, wenn die Probe komplex ist (die relative Reaktionstemperatur ist niedriger und je höher die Verlängerungstemperatur, desto besser die Primerbindungsspezifität).

Was die aktuelle Technologie betrifft, ist die Verstärkung bei variabler Temperatur zuverlässiger.

5. Wie kann das Risiko des Auslaufens von Nukleinsäureamplifikationsprodukten vermieden werden?
Derzeit wählen viele Hersteller das Drüsen-PCR-Röhrchen als Nukleinsäure-Reaktionsröhrchen, das durch Reibung abgedichtet ist, und die Temperaturdenaturierung bei der Denaturierung bei variabler Temperatur bei der PCR-Amplifikation bei variabler Temperatur erreicht 90 Grad
Celsius.Der wiederholte Prozess der Expansion bei Hitze und der Kontraktion bei Kälte stellt eine große Herausforderung für die Abdichtung des PCR-Röhrchens dar, und bei PCR-Röhrchen mit Stopfbuchse kann es relativ leicht zu Undichtigkeiten kommen.

Es ist vorzuziehen, die Reaktion mit einem vollständig versiegelten Kit/Röhrchen durchzuführen, um ein Austreten des Reaktionsprodukts zu vermeiden.Es wäre perfekt, wenn ein vollständig versiegeltes Kit für die Extraktion und Detektion von Nukleinsäuren entwickelt werden könnte.

Das neue vollautomatische Gerät zur Extraktion und Detektion von Nukleinsäuren von New Tech verfügt also über die oben genannten fünf optimalen Optionen.